關(guān)于ELISA試劑盒的每一步都要注意才行。 ELISA試劑盒加樣時(shí)的防錯(cuò)小經(jīng)驗(yàn) （1）用一張寫(xiě)滿(mǎn)字的紙，字越多越好，比如報(bào)紙，墊在下面，這樣，加過(guò)標(biāo)本的小孔看過(guò)去下面的字會(huì)變小，沒(méi)加的字正常，非常容易區(qū)分。 （2）可以利用液面反光與沒(méi)有加的孔加以區(qū)別 （3）在標(biāo)本加完后，再把加樣槍全壓下，使液面產(chǎn)生小氣泡，也可以加以區(qū)分 3、棋盤(pán)試驗(yàn)的操作方法： （1）將抗原按一定的梯度倍比稀釋后，按照ELISA從上到下（或者從左到右）的順序包被。 （2）將抗體按一定的梯度倍比稀釋后按照ELISA試劑盒從左到右或者從上到下加入。 （3）二抗的稀釋倍數(shù)是一定的，然后顯色，讀值。 OD值的測(cè)定時(shí)，波長(zhǎng)要根據(jù)顯色劑的不同而定，一般上大家都使用TMB顯色，450nm讀值。根據(jù)讀值得結(jié)果可以選定合適的抗原和抗體效價(jià)，這就是棋盤(pán) 實(shí)驗(yàn)的目的，如果抗原包被量已知而二抗的工作濃度不確定的話(huà)就用一抗和二抗作棋盤(pán)試驗(yàn)。
注意事項(xiàng)
1．ELISA試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4．請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，ELISA試劑盒以避免交叉污染。
6．底物請(qǐng)避光保存。
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